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蛋白共提取試劑盒的使用操作步驟
發(fā)布日期:
2017-02-22
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蛋白共提取試劑盒能夠簡單、快速的提取來源于哺乳動物細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞漿蛋白,所提取蛋白保持生物學(xué)活性。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高,有效避免核/漿蛋白的交叉污染,可以用于Western、Gel Shift、報告基因檢測以及酶活力測定等后續(xù)操作。
1.請在蛋白抽提前取出抽提試劑A、B和C進(jìn)行預(yù)冷
2.收集細(xì)胞,計數(shù)。離心去上清。
3.1×107細(xì)胞中加入0.5ml細(xì)胞核抽提試劑A,渦旋5秒以充分混勻,冰上孵育10分鐘。
注意:各種細(xì)胞的特性不同,需要根據(jù)不同細(xì)胞的特性調(diào)整細(xì)胞核抽提試劑A的用量,如果蛋白濃度小,按比例減少細(xì)胞核抽提試劑A及后續(xù)細(xì)胞核抽提試劑B、C的用量。
4.4℃ 3000 rpm離心 10min,吸棄上清。
5.加入374μL細(xì)胞核抽提試劑B,再加入26μL細(xì)胞核抽提試劑C
6. 將步驟5中溶液加入玻璃勻漿管中,用玻璃勻漿管冰上反復(fù)勻漿20次,冰上孵育30min。
7.4℃ 12,000 rpm離心20分鐘,收集上清(盡量收集干凈上清液)至新的離心管中,-20℃保存(此提取液為胞核蛋白)。