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產(chǎn)品名稱：

cDNA文庫構(gòu)建
產(chǎn)品價格：
廠商性質(zhì)： 工程商 產(chǎn)品時間： 2020-11-09
cDNA文庫是指某生物某發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合。標準cDNA文庫構(gòu)建的基本原理是用 Oligo（dT）作逆轉(zhuǎn)錄引物，或者用隨機引物，給所合成的cDNA加上適當?shù)倪B接接頭，連接到適當?shù)妮d體中獲得文庫。
 文庫構(gòu)建流程：

1.       樣品QC

 

2.       從總RNA中分離mRNA（原始文庫將采用至少2 µg mRNA進行構(gòu)建）

 

3.       以帶有NotI酶切位點的oligo（dT）Linker Primer為反轉(zhuǎn)錄引物，再在雙鏈cDNA的5’端加SalII adaptor

 

4.       NotI酶切、過柱去除小片段

 

5.       將合成的雙鏈cDNA與載體進行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細胞

 

6.       cDNA文庫的QC：檢測庫容量（重組子克隆數(shù)目）；隨機挑取30個克隆子進行PCR鑒定和雙向測序分析，檢測含插入片段的克隆子比例，檢測平均插入片段大小

 

客戶提供

 

        注明樣品的種屬，收集樣品后，應(yīng)將樣品立即置于干冰保持低溫運輸。

 

我們提供

 

       含有文庫的甘油菌和質(zhì)量分析鑒定報告

 

質(zhì)量保證

 

      文庫含有至少4 x 106個原始克隆

 

       樣品平均插入片斷保證大于1.0 kb

 

     有超過85%的載體含有插入片段

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